實驗室無菌室一般是在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間。面積不宜過大，約5—10平方米即可，高2.5米左右。無菌室外要設(shè)一個緩沖間，緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。

1、安全注意事項

 操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)關(guān)掉紫外燈或者臭氧設(shè)備。

2、規(guī)程

2.1. 無菌室應(yīng)該有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級，室內(nèi)溫度保持在20—24℃，濕度保持在45—60%。超凈臺潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。

2.2 無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

2.3  嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

2.4  無菌室應(yīng)備有工作濃度消毒液，5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液等等。

2.5 無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

2.6 需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

2.7  工作人員進(jìn)入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套，方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作。

2.8 無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同事打開空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)行吹風(fēng)，操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

2.9 供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70%的酒精棉球消毒外表面。

2.10  每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。

2.11  吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

2.12  接種針每次使用前后，必須通過火焰滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

2.13  帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。

2.14  如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石炭酸溶液或3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

2.15  凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

2.16  無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml,放至凝固后，倒置于30—35培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，證明無菌后，取平板3~5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30—35培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。

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